Enzymologia 04-BIO-ENZY-SP4

Wykłady:
Źródła informacji o enzymach. Osiągnięcia enzymologii a postęp nauk biologicznych. Znaczenie biochemii gleb dla określania wskaźnika żyzności i urodzajności poprzez oznaczenie enzymów glebowych. Białko jako cząsteczka koloidalna. Enzymy jako biokatalizatory (zasada działania, specyficzność, zymogen, katalizatory niebiałkowe). Mechanizm działania enzymów – teorie, modele, metody pomiaru aktywności enzymatycznej. Wpływ warunków fizyko-chemicznych na szybkość reakcji enzymatycznej (kofaktory, koenzymy, grupy prostetyczne i reakcje przebiegające z ich udziałem). Witaminy a koenzymy. Klasyfikacja enzymów. Rola cynku w aktywowaniu karboksypeptydazy A, anhydrazy węglanowej, dehydrogenazy alkoholowej, alkalicznej fosfatazy, polimerazy DNA i RNA. Kinetyka reakcji enzymatycznych ( równanie Michaelisa-Menten). Omówienie sposobów wyznaczania stałych kinetycznych Km i Vmax. Enzymy allosteryczne i ich rola w kontrolowaniu metabolizmu. Układy wieloenzymatyczne – konjugaty wieloenzymatyczne. Indukcja i represja enzymatyczna jako procesy syntezy białek. Izoenzymy. Mutageneza i mutanty biochemiczne, przykłady stanów patologicznych. Znaczenie enzymów w technologii żywności oraz w degradacji detergentów. Badanie aktywności enzymów preparatach biologicznych i glebie, ich ekstrakcja i oczyszczanie.

Ćwiczenia:
Oksydoreduktazy w ekstrakcie ziemniaczanym – wykrywanie aktywności. Wysalanie białka enzymowego fosfatazy kwaśnej. Wyznaczanie stałej Km dla fosfatazy kwaśnej i badanie wpływu stężenia enzymu na szybkość reakcji. Czynniki warunkujące aktywność enzymów na przykładzie ureazy. Oznaczanie aktywności peroksydazy z korzenia chrzanu. Badanie kinetyki reakcji enzymatycznych na przykładzie inwertazy. Badanie rzędu reakcji i wyznaczanie stałej „k” na przykładzie hydrolizy sacharozy. Wysalanie białka enzymowego fosfatazy kwaśnej. Oksydoreduktazy w ekstrakcie ziemniaczanym – wykrywanie aktywności. Wyznaczanie szybkości początkowej, stałej Km i optimum pH fosfatazy kwaśnej ziemniaka. Badanie kinetyki reakcji enzymatycznych na przykładzie inwertazy. Oznaczanie aktywności amylaz ze słodu jęczmiennego. Badanie rzędu reakcji i wyznaczanie stałej „k” na przykładzie hydrolizy sacharozy. Oznaczanie aktywności katalazy wg Johnsona J.L. i Temple K.L.